即便是制備合格的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL),如果存放不當(dāng),也可能在短時間內(nèi)變質(zhì)失效,失去生物學(xué)活性乃至產(chǎn)生毒性。它的存放要求堪稱“嚴(yán)苛”,稍有不慎就會前功盡棄,這背后是脂蛋白自身的化學(xué)特性決定的:它富含不飽和脂肪酸,易受光、氧、溫度影響而進一步氧化乃至降解。
首先,避光是存放
氧化低密度脂蛋白的首要原則。光照,尤其是紫外線,會加速脂質(zhì)的過氧化反應(yīng),使ox-LDL進一步氧化乃至產(chǎn)生醛類等有毒物質(zhì),損害其生物學(xué)功能。所以,ox-LDL溶液要保存在棕色玻璃瓶中,整個存放過程都要避開直射光,哪怕是室內(nèi)普通照明光線,也可能隨著時間累積對ox-LDL造成損傷,如果需要長期存放,更要放在暗盒或用鋁箔包裹嚴(yán)實。
低溫環(huán)境是延緩ox-LDL氧化的另一關(guān)鍵手段。通常建議在4℃(短期存放)或-80℃(長期保存)條件下存放,前者適合數(shù)天內(nèi)的短期使用,后者能較好地長期保存其活性。需要注意的是,凍存前最好將ox-LDL分裝成小份,避免反復(fù)凍融帶來的結(jié)構(gòu)破壞;同時,凍存用的緩沖液中常加入一定量的抗氧化劑(如EDTA、BHT等)以抑制凍存過程中的自發(fā)氧化。即使如此,每次凍融也應(yīng)盡量輕柔,避免劇烈振蕩導(dǎo)致脂蛋白結(jié)構(gòu)損傷。
除此之外,氧化低密度脂蛋白存放環(huán)境的無氧條件也值得關(guān)注。有些實驗室會采用氮氣或氬氣吹掃容器后密封保存,以大程度減少氧氣對ox-LDL的影響;即便是4℃短期存放,也建議在緩沖液中加入適量EDTA螯合金屬離子,抑制金屬催化氧化反應(yīng)的發(fā)生。有條件的實驗室還會定期檢測存放中的ox-LDL,如通過電泳檢測其電荷變化,或用特異性抗體檢測其抗原性變化,以此判斷存放中的ox-LDL是否仍保持預(yù)期狀態(tài)。
存放記錄同樣不可忽視。一旦發(fā)現(xiàn)存放中的氧化低密度脂蛋白出現(xiàn)渾濁、沉淀、顏色改變等異常跡象,要及時檢測其生物學(xué)活性,判斷是否仍可用于實驗。哪怕是合格制備的ox-LDL,如果存放超過有效期或出現(xiàn)明顯異常,也應(yīng)果斷棄用,以免影響后續(xù)實驗結(jié)果的可靠性。可以說,ox-LDL的存放是一場與時間賽跑的過程,只有嚴(yán)格遵循存放規(guī)范,才能最大限度地維持其生物學(xué)功能,為科研工作提供穩(wěn)定可靠的實驗材料。
