PicoGreen是一種特異性結(jié)合雙鏈DNA dsDNA) 的飽和熒光染料，激發(fā)波長為480 nm，發(fā)射波長為520 nm，與大多數(shù)熒光計(jì)和熒光酶標(biāo)儀兼容。PicoGreen僅與dsDNA結(jié)合后才發(fā)出熒光，不受核苷酸和單鏈核酸的影響，產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度與dsDNA濃度成正比，且無序列依賴性，非常適合于dsDNA的定量檢測，可檢出25 pg/ml~1 μg/ml濃度范圍內(nèi)的dsDNA。PicoGree有以下優(yōu)勢：1 靈敏度高：可檢測低至200 pg的dsDNA，節(jié)省寶貴樣品；2 特異性強(qiáng)：在等摩爾的RNA存在的條件下，對dsDNA具有特異性；3 耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無需從反應(yīng)混合物中純化DNA。4 易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和熒光計(jì)兼容。5 適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。

參考操作：

一．染料工作液的配置 PicoGreen dsDNA定量試劑取出后回溫至室溫，該試劑是以100 µL 200×的濃縮液形式保存于無水DMSO中的。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200 的比例稀釋PicoGreen濃縮液。 注意事項(xiàng)：

1 由于試劑容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。

2 PicoGreen試劑見光易降解，所以應(yīng)將配好的溶液用鋁箔包住或放置暗處避光保存。

3 溶液最好在配制好數(shù)小時(shí)內(nèi)使用，以保證最佳結(jié)果。

二．標(biāo)準(zhǔn)品工作液的配制 取λDNA標(biāo)準(zhǔn)品，用無菌TE buffer配制成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品工作液。

注意事項(xiàng)：標(biāo)準(zhǔn)品也可用其他已知濃度的純化DNA；有一些產(chǎn)品描述可使用小牛胸腺DNA作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照我們實(shí)際操作經(jīng)驗(yàn)，并不推薦它作為標(biāo)準(zhǔn)品。  

三．標(biāo)準(zhǔn)品工作液稀釋

1 母液稀釋：使用TE緩沖液將100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋為2 μg/mL。

2 梯度稀釋：參照表1，對DNA標(biāo)品母液進(jìn)行梯度稀釋。 表1 標(biāo)曲制作 TE體積（μL） 2 μg∕mL DNA標(biāo)準(zhǔn)品母液（μL） Picogreen染料工作液（μL） DNA標(biāo)準(zhǔn)品終濃度 0 1,000 1,000 1 μg/mL 900 100 1,000 100 ng/mL 990 10 1,000 10 ng/mL 999 1 1,000 1 ng/mL 1,000 0 1,000 Blank  

3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：向經(jīng)稀釋的各梯度標(biāo)準(zhǔn)品溶液中加入1 mL染料工作液混勻，避光室溫孵育5 min。使用酶標(biāo)儀或熒光計(jì)檢測熒光強(qiáng)度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；將溶液加入比色皿或取200 μL加入微孔板，確信不要在樣品中引入氣泡；以1×TE緩沖液空白對照，測定標(biāo)準(zhǔn)品熒光值；用標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度（ng/mL）對應(yīng)的熒光強(qiáng)度作直線回歸，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4 測量剩余樣品的熒光值：熒光計(jì)將給出一個(gè)直接的濃度讀數(shù)，數(shù)據(jù)可以用來產(chǎn)生DNA濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

注意事項(xiàng)：

為了您的健康，請佩戴一次性手套。

本產(chǎn)品僅限科研用途。